組織解析の初心者の方々へ

TSK @TSK010

組織解析の初心者の方々へ、その１。 筋肉を新鮮凍結してみましょう。筋組織に蜂の巣が見えたら、残念賞。 もともと穴が開いていた？いえいえ、何の穴でしょう？

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組織解析の初心者の方々へ、その２。 GFPを発現する組織を、４％PFA固定してみましょう。 固定時間は、０分、３０分、６０分、９０分、１２０分、４時間、６時間、１２時間と振りましょう。温度は、on iceまたは４℃。　切片を作成して観察してみましょう。

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組織解析の初心者の方々へ、その３。 シングルセル化した細胞を、４%PFAで固定して、固定が抗体の染色性に与える影響を観察しましょう。時間は、０分、5分、１５分、３０分、６０分と振りましょう。もちろんon iceで。

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組織解析の初心者の方々へ、その４。 蛍光標識した細胞をフローサイトメーターで分取して、レーザー共焦点顕微鏡で観察しましょう。フローサイトメーターの蛍光強度のスケールはlog、レーザー共焦点顕微鏡の蛍光強度のスケールはlinearですよ。

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組織解析の初心者の方々へ、その５ 免疫蛍光染色で、直接標識抗体と、ビオチン化抗体と、標識二次抗体使用とで、どれが一番明るいか比較しましょう。（脂肪組織に注意）また、観察するレンズを10×、20×、40×、63×と変えてみましょう。ところで、開口数と透過率って何ですか？

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組織解析の初心者の方々へ、その６ フローサイトメーターならネガテイブコントロールは、何を用いますか？目的の抗原タンパクのKOマウス、あるいは蛍光タンパクT-マウス、あるいはcontrol IgGですね？自家蛍光や非特異的染色に注意です。ブロッキングと二次抗体の質は大事です。

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組織解析の初心者の方々へ、その７ 最も大切なのは観察者の眼です。まずは、藤田・藤田の標準組織学を手元に置きましょう。（動物種の違いに注意）そして、最新技術を駆使して新発見という前に、JEMやAnat Recなどで解剖学者たちの膨大な仕事を知りましょう。